Hur man identifierar en bakterie

Innehåll

• stadier
• Metod 1 Identifiera en bakterie efter Gram-fläck
• Metod 2 Utför Ziehl-Neelsen Färgningstest
• Metod 3 Studera beteende och utseende hos bakterier
• Metod 4 Tolk alla resultat

I den här artikeln: Identifiera en bakterie av Gram-färgning Utför Ziehl-Neelsen-färgningsförsökStudiera beteenden och utseendet hos bakterier.

Identifiering av bakterier är en komplex uppgift. En av orsakerna är att enligt uppskattningar finns det mellan 10 000 och 1 miljard bakteriesorter i världen! Att korrekt identifiera bakterier är mycket viktigt, speciellt inom det medicinska området, där korrekt behandling av en sjukdom i hög grad beror på vilken typ av mikrob som orsakar problemet. I de flesta fall görs identifiering på grundval av eliminering. För att identifiera en bakterie måste du utföra färgningstester, analysera dess utseende och se hur den reagerar bra på olika förhållanden. Om du behöver ett snabbt resultat, ta ett DNA-prov för att skicka till ett laboratorium.

stadier

Metod 1 Identifiera en bakterie efter Gram-fläck

1. Bestäm om bakterierna är Gram-positiva eller negativa. Gramfärgning är en metod för att dela bakterier mellan de två vanligaste typerna: Gram-positiv och Gram-negativ. De förstnämnda har en tjock cellvägg bestående av en polymer som kallas peptidoglycan, som har den bästa färgningen som de tunna väggarna hos Gram-negativa bakterier.
   • Några vanliga typer av Gram-positiva bakterier är streptokocker, stafylokocker, mikrokockor (eller mikrokocker) och listeria.
   • Här är några vanliga exempel på gramnegativa bakterier: Neisseria, Acinetobacter, Moraxella, Enterobacteriaceae, Vibrio, Haemophilus, Fusobacterium och Campylobacter.
2. Vidta lämpliga skyddsåtgärder. De bakterier och kemiska element som du kommer att använda under testet utgör en risk för din hälsa. Bär skyddsglasögon, nitrilhandskar engångsbruk och en lablack när du utför färgningstestet. När du är klar lägger du handskar och allt annat förorenat material i en speciell påse. Kom ihåg att följa procedurerna på ditt laboratorium för att bli av med påsen för förorenade produkter.
3. Sätt provet för att observera det på en glasrutschbana. För att börja testet, placera en droppe eller bakterieprov på en steril bild. Skjut sedan bladet över en Bunsen-brännare tänd tre gånger för att fixa provet och förhindra att det kommer ut ur plattan när du sköljer eller tillsätter reagensen.
4. Tillsätt 5 droppar lila kristaller till bladet. Häll fem droppar av en kristallviolett lösning på provet. Vänta en minut tills provet tar upp kristallviolet.
   • Håll bladet på plats med klädnålar så att du inte fläckar händerna.
5. Tvätta bladet noggrant för att ta bort fläcken. Använd en kran eller en klämflaska och låt vattnet rinna mycket långsamt i upp till fem sekunder för att ta bort bläckrester som inte har fastnat i provet.
6. Häll fem droppar av en Gram Diode Stain på bilden. Det är en lösning som består av diode, natriumbikarbonat och kaliumdiodid som gör att kristallviolet smälter med cellväggarna i bakterierna. Häll fem droppar av lösningen på provet och låt stå i en minut.
7. Tvätta provet med alkohol eller mjölksyra. Alkohol och laceton är blekmedel och eliminerar färgning av bakteriecellväggar om de är Gram-negativa. Häll några droppar blekmedel på provet och låt det fungera i högst tre sekunder. Pröva därefter försiktigt med vatten i fem sekunder för att ta bort dessa blekmedel.
   • Om du låter blekmedlet fungera under lång tid kan det leda till att Gram-positiva bakteriefärgningar försvinner, vilket kan leda till falskt negativt.
8. Utför ett kontrasttest med safranin. Safranin är ett rött färgämne som står i kontrast till kristallvioleten och därmed färgar bakterierna påverkade inte av lila färgningar. Häll cirka fem droppar safranin på provet och låt stå i en minut. Pröva därefter försiktigt med vatten i fem sekunder.
9. Visualisera ditt prov vid 1000X förstoring. Bakterierna blir lila eller lila om det är Gram-positivt, eller rosa om det är Gram-negativt på grund av safranin.

Metod 2 Utför Ziehl-Neelsen Färgningstest

1. Använd den här tekniken för att upptäcka syrasnabba bakterier. Dessa arter innehåller en större mängd lipider, vilket gör dem mer resistenta mot färgämnen som används vid Gram-färgning. De syrabeständiga bakterierna tillhör släkten Mycobacterium, som inkluderar bakterien som är ansvarig för tuberkulos (M. tuberculosis). För att färga en syrabeständig bakterie måste du använda ett rött färgämne som kallas karbolisk fuchsin, resistent mot sköljning med sura eller svavelsyralösningar.
2. Vidta lämpliga skyddsåtgärder. Kemiska och biologiska material som används under Ziehl-Neelsen-färgning kan vara farliga. Dessutom måste du också använda värmekällor, till exempel ett Bunsen-munstycke, en elektrisk värmare eller en alkohollampa. Följ anvisningarna nedan för att utföra testet.
   • Sätt på skyddsglasögon, nitrilhandskar och en lablack.
   • Var noga med att inte andas in ångor från färgämnen och blekmedel och låt inte droppar spruta ögonen eller huden. Håll behållarna öppna under en huva.
   • Var mycket försiktig när du värmer upp bladet. De flesta kemikalier som används är brandfarliga. Det kan också finnas spår av brandfarliga ämnen på objektglaset eller annan utrustning.
3. Förbered bladet. Med cirkulära rörelser sprider du en liten mängd bakterieprov jämnt i mitten av en steril bild. Ditt prov bör uppta cirka 10 mm och 20 mm.
4. Torka bladet. Placera bladet på torkstrukturen med provet uppåt. Låt det torka naturligt i 30 sekunder. Försök inte torka bladet med en trasa.
5. Säkra provet med värme. Med provet uppåt, skjut bladet två eller tre gånger över en upplyst Bunsen-brännare. Du kan också placera bladet på en elektrisk värmare genom att ställa in temperaturen mellan 65 ° C och 75 ° C i minst två timmar. Var försiktig så att du inte kokar eller bränner provet.
6. Lägg till den karboliska fuchsin i bladet. Häll flera droppar av denna lösning på bilden. Häll tillräckligt för att helt täcka provet.
7. Värm bladet för att fixera färgämnet. Värm bilden försiktigt över en Bunsen-brännare eller en alkohollampa, med provet riktat uppåt, eller placera det på en elektrisk värmare. Värm bladet till 60 ° C eller tills det börjar släppa ånga. Låt färgämnet agera i fem minuter.
   • Om du använder en elektrisk värmare, slå på den vid 60 ° C. Om du väljer alkohollampan eller Bunsen-brännaren, bör du förvänta dig att se ångor.
   • För att hålla bladet vid önskad temperatur i fem minuter, värm det intermittent.
   • Var noga med att inte koka, bränna eller torka provet.
8. Skölj bladet med kallt vatten. Låt den svalna i fem minuter och skölj försiktigt i några sekunder med klart vatten. Använd kranvatten eller en klämflaska för att ta bort färgningsfläckar som inte har fastnat i provet.
9. Häll på provet sur alkohol eller svavelsyra. Använd en volym på 3 volymprocent (volym / volym) alkohol eller 20% svavelsyra för att täcka provet helt. Låt syran fungera tills färgen bleknar och når en mycket ljusrosa nyans. Processen tar vanligtvis cirka tio minuter.
10. Skölj bladet med rent vatten. Tvätta bladet försiktigt under en kran eller med en pressflaska. Ta bort alla syra- och färgämnesrester bra.
11. Lägg till kontrastmedlet. När du har sköljt bilden, häll på färgämnet av malakitgrönt eller metylenblått. Dessa två lösningar skapar en blåaktig eller grönaktig bakgrund på vilken det röda färgämnet kommer att dyka upp, liksom andra biologiska material, såsom mänskliga celler och icke-syrabeständiga bakterier. Låt ämnena fungera i en till två minuter.
12. Skölj och torka bladet. Skölj noggrant med vatten för att ta bort överskottskontrast. När du är klar, torka baksidan av bladet med en torr trasa och låt det torka naturligt på ett stativ.
13. Visualisera ditt prov vid 1000X förstoring. De syrabeständiga bakterierna blir röda eller mörkrosa. Andra bakterier, icke-bakteriella celler och bladets bas blir grön eller blå.

Metod 3 Studera beteende och utseende hos bakterier

1. Analysera bakteriens form. Efter att ha gjort färgningstestet för att bestämma om bakterierna är Gram-positiva, Gram-negativa eller syra-resistenta, är det dags att identifiera arten mer exakt. Först analysera formen på bakterierna på bilden. De tre vanligaste formerna är cocci (sfärisk), spiraler och baciller (stavform).
   • Det finns flera varianter av dessa former. Rundformade bakterier (coccus), till exempel, kan förekomma i par (diplokocker), i kedjor, i högar eller i grupper om fyra (tetrader).
2. Ta reda på om bakterierna är aeroba eller anaeroba. Ta två bakterieprover och skapa två separata kulturer. Månen måste vara anaerob (odlas utan syre), medan den andra måste vara aerob (odlad med syre). Förvara den anaeroba kulturen vid 35 ° C på en syrefri plats i minst 48 timmar innan man observerar tillväxten.
   • Om bakterier växer i en miljö utan syre, men inte när de utsätts för syre, betyder det att de är anaeroba.
   • Även om de utvecklas i en syresatt miljö, men inte i frånvaro av syre, är de aeroba.
   • När de utvecklas i båda miljöerna pratar vi om fakultativa anaeroba bakterier.
3. Utför ett rörlighetstest. En bakterie är mobil om den kan röra sig ensam med en eller flera flageller. Graden av rörlighet är mycket viktig vid identifiering av vissa bakteriearter. Det finns flera typer av rörlighet, men det säkraste och mest läsbara sättet är det halvfasta mediet.
4. Skapa en kultur för motilitetstestet. Förbered en bakteriekultur i en kulturbuljong. Följ anvisningarna nedan för att förbereda buljongen du väljer.
5. Inokulera kulturen i en halvfast agar för rörlighetstester. Belägg en del av buljongkulturen med en steril ympningsnål. Plantera försiktigt nålen i det halvfasta dagröret, till exempel TTC lagar, som du har förberett för testet. Nålen måste tränga in i 2/3 av agar.
   • När du är klar, ta försiktigt bort nålen och se till att inte överskrida gränserna för ympningszonen.
   • Inkubera röret vid 30 ° C i 48 timmar.
6. Läs testresultatet. Agaren för rörlighetstestet blir röd vid kontakt med bakterier. Om de är rörliga kommer den röda eller rosa färgningen att spridas över hela ämnet. Annars kommer färgning att begränsas till injektionsstället.

Metod 4 Tolk alla resultat

1. Samla dina kommentarer. För att veta vilken typ av bakterier, måste du samla in information som erhållits från kulturerna, målarprover och observation av formerna. Om du undersöker en patients prov kan symtomen som de presenterar också hjälpa till att bestämma vilken typ av bakterier som är lämplig.
   • Om testen till exempel visar att bakterierna är gramnegativa, anaeroba, icke-rörliga och du märker symtom som buksmärta, illamående och kräkningar hos patienten, är det troligt att patienten lider av bakterieinfektion. fragilis.
2. Se en databas. Det finns tusentals arter av bakterier i världen. Det är omöjligt att veta allt utanför. Du kommer troligen att behöva konsultera en klinisk mikrobiologibok eller online-databas för att jämföra testresultat med information om bakteriearter.
   • Det finns utmärkta online-resurser för att identifiera bakterier, men de flesta av dessa databaser finns tillgängliga på engelska, inklusive Patricbrc.org och GlobalRPh. Men du kan fortfarande hitta användbar information på webbplatsen för INRA International Microbial Resource Center.
3. Gör ett genetiskt test för att veta den exakta arten av bakterierna. I vissa fall kan du behöva identifiera bakteriens arter. Den snabbaste och enklaste metoden är att utföra ett DNA-test. DNA-test är också användbara för att identifiera bakterier som är resistenta mot traditionella former av färgning och kultur. Numera är DNA-test på mikroorganismer mycket snabba och kan vara färdiga på mindre än två timmar.
   • Om du inte har tillgång till ett laboratorium som utför genetisk sekvensbestämning av mikroorganismer, skicka ett bakterieprov till en specialiserad byrå.